1 Богомолова О.А. 1 Шатова Ю.С. 1 Верескунова М.І. 1 Чернікова Е.Н. 1 Кучкина Л.П. 1 Луганська Р.Г. 1 Бакуліна С.М. 1 Водолазький Д.І. 1
1 ФГБУ «Ростовський науково-дослідний онкологічний інститут» Міністерства охорони здоров'я Росії
Генетична схильність є одним з головних чинників розвитку раку молочної залози, на частку якого припадає від 5 до 10% випадків цього захворювання. У 30% спадкові форми раку молочної залози асоційовані з наявністю мутацій в генах BRCA1 / 2, що відносяться до складного комплексу системи репарації ДНК. Нами були вивчені спектр і частота народження гермінальних мутацій в генах ВRCA1 і ВRCA2 у 133 пацієнток з клінічними ознаками спадкового раку молочної залози, які постійно проживають на території Південного федерального округу. Сумарна частота мутацій в генах BRCA1 і ВRCA2 склала 14,2% від загального числа обстежених пацієнток. Було виявлено два типи мутацій: 16 зразків (12%) несли мутацію 5382 insC в 20 екзоні гена BRCA1 і 3 зразка (2,2%) містили мутацію 300T> G в цьому ж гені. Генетичних змін в гені BRCA2 не було виявлено. Проведена робота свідчить про адекватність використання даної панелі маркерів для пацієнтів ЮФО, не виключаючи можливості її розширення.
спадковий рак молочної залози
гени brca1
BRCA2
1. Злоякісні новоутворення в Росії в 2012 році (захворюваність і смертність) / під ред. А.Д. Капріні, В.В. Старинського, Г.В. Петрової. - М .: ФГБУ «МНІОІ ім. П.А. Герцена »МОЗ Росії, 2014. - 12 с.
2. Любченко Л.Н. Спадковий рак молочної залози і / або яєчників: ДНК-діагностика, індивідуальний прогноз, лікування і профілактика: автореф. дис. ... д-ра мед. наук. - Москва, 2009. - 50 с.
3. Кисельов В.І., Мужнейк Е.Л. Спадковий рак і сучасні можливості лікарської корекції генетичних дефектів В.І.. Кисельов, Е.Л. Мужнейк. - М., 2011. - С. 1-16.
4. Phelan CM, Kwan E., Jack E. et al. A low frequency of non-founder BRCA1 mutations in Ashkenazi Jewish breast-ovarian cancer families // Hum. Mutat. - 2002. - V. 20 (5). - P. 352-357.
5. Papi L., Putignano AL, Congregati C. et al. Founder mutations account for the majority of BRCA1-attributable hereditary breast / ovarian cancer cases in a population from Tuscany, Central Italy // Breast Cancer Res. Treat. - 2009. - V. 117 (3). - P. 497-504.
6. Møller P., Heimdal K., Apold J. et al. Genetic epidemiology of BRCA1 mutations in Norway // Eur. J. Cancer. - 2001. - V. 37 (18). - P. 2428-2434.
7. Rafnar T., Benediktsdottir KR, Eldon BJ et al. BRCA2, but not BRCA1, mutations account for familial ovarian cancer in Iceland: a population-based study // Eur. J. Cancer. - 2004. - V. 40 (18). - P.2788-2793.
8. Górski B., Jakubowska A., Huzarski T. et al. A high proportion of founder BRCA1 mutations in Polish breast cancer families // Int. J. Cancer. - 2004. - V. 110 (5). - P. 683-686.
9. Plakhins g., Irmejs a., Gardovskis a. et al. Genotype-phenotype correlations among brca1 4153dela and 5382insc mutation carriers from Latvia // BMC MEDICAL GENETICS. - 2011. - V. 12. - P. 147.
10. Любченко Л.Н. Генетичне тестування при спадковому раку молочної залози /Л.Н. Любченко // Практична онкологія. - 2014. - т.15, № 3. - С. 107-117.
11. Petrucelli N., Daly MB, Feldman GL Hereditary breast and ovarian cancer due to mutations in BRCA1 and BRCA2 // Genet. Med. 2010. Vol. 12 (5). P. 245-259.
12. Імянітов Е.Н. Спадковий рак молочної залози /Е.Н. Імянітов // Практична онкологія. - 2010. - Т.11, № 4. - С. 264.
13. Пржедецкій Ю.В., Водолазький Д.І., Шатова Ю.С., Комова Е.А., Двадненко К.В. BRCA-мутації у хворих з клінічними ознаками спадкового раку молочної залози в південному федеральному окрузі /Ю.В. Пржедецкій [и др.] // Злоякісні пухлини. - 2015. - № 4-2 (16). - С. 121-122.
14. Сабіров А.Х., Федоров М.М., Кудряков А.Ю., Синяков А.Г. Оптимізація діагностики, лікування та диспансеризації хворих з спадково-зумовленими раком молочної залози /А.Х. Сабіров [и др.] // Медична наука й освіта Уралу. - 2012. - №3. - С. 81-83.
15. Біттуева М.М. Аналіз спадкових форм раку молочної залози за чотирма мутаціям гена BRCA1 в Кабардино-Балкарській республіці /М.М. Біттуева // Архіваріус. - 2016. - №10 (2). - С. 5-6.
На сьогоднішній день рак молочної залози (РМЗ) як і раніше займає лідируючі позиції серед онкологічних патологій у жінок в світі [1].
Генетична схильність є одним з головних факторів ризику розвитку даного захворювання, на частку якого припадає від 5 до 10% випадків усіх злоякісних новоутворень даної локалізації [2].
В основі розвитку сімейних форм РМЗ лежать спадкові мутації в генах BRCA 1/2, CHEK2, TP53, NBN, PALB2 і ін. Однак близько 30% з усіх спадкових випадків обумовлено мутаціями в генах BRCA (Breast Cancer Associated) 1 і BRCA2. Ці гени відносяться до високо пенетрантность, функцією яких є участь в підтримці цілісності геному і забезпеченні репарації подвійних розривів ДНК, що виникають при впливі різних факторів [3].
Жінки, які мають спадкові мутації в гені BRCA1, мають ризик розвитку РМЗ 45-60% у віці до 40 років. У свою чергу, при наявності мутацій в гені BRCA2, ризик РМЗ становить 25-40% [4]. Серед здорових осіб можна виділити групу носіїв мутацій, у яких онкологічна патологія розвинеться з високою ймовірністю протягом життя. Також відомо, що ризик розвитку раку в контрлатеральной молочній залозі в разі виявлення мутантного типу гена BRCA у віці 41-50 років становить 6,3%, в той час як серед хворих старше 60 років ризик розвитку контрлатерального РМЗ дорівнює нулю [4]. Генетично обумовлені форми РМЗ, на відміну від спорадичних, мають свої особливості перебігу та прогнозу і вимагають індивідуального підходу як в діагностиці, так і в профілактиці даного захворювання.
Міжнародна база даних (Breast Cancer Information Core) містить понад 300 різних варіантів мутацій генів BRCA 1/2. Незважаючи на те, що мутації генів BRCA1 / 2 надзвичайно різноманітні, при обстеженні населення в різних країнах часто можна простежити т.зв. «Ефект засновника» (foundereffect), що полягає в переважанні будь-яких конкретних мутацій BRCA1 / 2 у даної популяції (табл.1). Так, підвищена частота мутацій BRCA1 185delAG, BRCA1 5382insC і BRCA2 6174delT характерна для євреїв Ашкеназі - на ці три мутації доводиться 98-99% всіх мутацій в генах BRCA1 і BRCA2 [5]. В Італії з усіх виявлених мутацій в гені BRCA1 мутації BRCA1 3347delAG, BRCA1 3404delA, BRCA1 1499insA, BRCA1 5181delGTT складають більше 73% [6]. Для Норвегії характерні мутації в гені BRCA11675delA, 3347delAG, 816delGT і 1135insA, на які припадає понад 68% всіх виявлених мутацій [7]. В Ісландії практично єдиною мутацією є 999del5 гена BRCA2 [8]. У країнах Східної Європи більш ніж в 70% випадків виявляються мутації BRCA1 5382insC, BRCA1 4154delA і BRCA1 T300G [9-12].
Таблиця 1
Спектр переважаючих мутацій в різних країнах
Країна
переважна мутація
Австрія
BRCA1 300T> G (C61G)
Італія
BRCA13404delA, BRCA1 3347delAG
Німеччина
BRCA1 4184del4, BRCA1 2457C> T
Греція
BRCA1 5331G> A, BRCA15370C> T
Норвегія
BRCA1 1675delA, BRCA1 3347delAG
Фінляндія
BRCA1 4216-2A> G, BRCA2 999del5
Ісландія
BRCA2999del5
Згідно з рядом російських досліджень переважаючими мутаціями на території Російської Федерації є: 5382insC, С61G, 185delAG, 4154delA, 2080delA, 6174delТ, які охоплюють до 70-90% всього спектра виявлених мутацій в цих генах. Однак велика кількість робіт доводять той факт, що спектр мутацій в генах BRCA1 і BRCA2 різниться від регіону до регіону [13, 14, 15].
Вплив генетичної схильності до РМЗ у жінок в Південному Федеральному окрузі вивчено недостатньо, таким чином, метою нашої роботи стало виявлення спектра і частот зустрічальності мутацій в генах BRCA1 і BRCA2 в популяціях ЮФО серед пацієнток з клінічними ознаками спадкового раку молочної залози.
матеріали та методи
Нами було проведено молекулярно-генетичний аналіз ДНК 133 пацієнток з верифікованим РМЗ і клінічними ознаками спадкового РМЗ, що проходили стаціонарне лікування в ФГБУ «Ростовський науково-дослідний онкологічний інститут» (РНІОІ) МОЗ Російської Федерації, які постійно проживають в ЮФО. Медіана віку на момент постановки діагнозу становила 49 років, а вік варіював в діапазоні від 24 до 79 років.
При відборі пацієнток для включення в дослідження враховувалися такі клінічні ознаки [2,13]:
- молодий вік початку захворювання (до 50 років);
- онкологічно обтяжений сімейний анамнез;
- наявність первинно-множинних пухлин;
-тріпл-негативний статус рецепторів ER, PR, Her2.
Геномної ДНК виділяли з лейкоцитів периферичної крові за допомогою лізуючого SDS-яке містить буфера в присутності протеїнази-К і подальшої фенол-хлороформно екстракції. Концентрацію отриманих препаратів ДНК вимірювали на флюоріметре Qubit 2.0® (Invitrogen, США) з використанням набору Quant-iT ™ dsDNA (HS) AssayKit (Invitrogen, США) і доводили до 2 нг / мкл. Постановку реакції ПЛР-ампліфікації проводили за допомогою комплекту реагентів «BRCA-скрін» (ІнтерЛабсервіс, Росія), призначеного для визначення 6 мутацій в генах BRCA1 / 2 (табл. 2) згідно з протоколом виробника на термоциклері MaxygeneGradient (Axygen). Для ідентифікації ПЛР-продуктів використовували метод електрофорезу в 2% агарозному гелі і систему гель-документування GelDoc XR PLUS (BioRad, USA). Надалі продукт ампліфікації піддавали очищенню, денатурації і відмиванні за допомогою станції для пробопідготовки (VacuumPrepWorkstation, Qiagen, Germany). Потім одноланцюговий ПЛР-продукт відпалювали з секвеніруют праймерами при 80 0С і використовували для проведення реакції піросеквенірованія в системі генетичного аналізу PyroMark Q24 (Qiagen, Germany). Отримані дані аналізували за допомогою програмного забезпечення PyroMark Q24 Software (Qiagen, Germany).
Таблиця 2
Спектр аналізованих мутацій в генах BRCA1 і BRCA2 з використанням набору реагентів "BRCA-скрін" ( «ІнтерЛабсервіс», Росія):
локус
поліморфізм
Послідовність нуклеотидів для аналізу
BRCA1
185delAG
TCTAAGATTTTC
BRCA1
300T> G (C61G)
T / GGTCCTTTA
BRCA1
2080delA
TCTTTATC
BRCA1
4154delA
GAAGAAAGAGGA
BRCA1
5382insC
GATTCTCTTG
BRCA2
6174delT
ACTTGCTGT
Результати та обговорення
В ході проведення молекулярно-генетичного дослідження 133 зразка геномної ДНК виділеної з лейкоцитів периферичної крові пацієнток з клінічними ознаками спадкового раку молочної залози були виявлені 19 зразків, які несуть мутацію в досліджених генах, що склало 14,2% (рис.1).
З усього проаналізованого спектра було виявлено два типи мутацій: 16 зразків несли мутацію 5382 insC в 20 екзоні гена BRCA1 і 3 зразки містили мутацію 300T> G в цьому ж гені. Генетичних змін в гені BRCA2, в рамках нашого дослідження, не було виявлено.
Мал. 1. Частота і спектр мутацій в генах BRCA1 і BRCA2
Для пацієнток, які несуть мутації, були характерні инфильтрирующий протоковий, Медулярний, білатеральний і кріброзние раки. За гістологічним висновками переважала інфільтрірующая карцинома. Тричі негативний підтип РМЗ серед пацієнток, що мають мутації 5382 insC в гені BRCA1, був виявлений у двох випадках або в 12,5% випадків від усіх мутацій 5382 insC в гені BRCA1. Люмінальной тип В спостерігався в 3 випадках (18,75%), Неr2-позитивними були 2 пацієнта (12,5%), а люмінальной А підтип зустрівся тільки 1 раз (6,25%).
При аналізі сімейного онкологічного анамнезу РМЗ був відзначений у 14 кровних родичів по материнській лінії (76,9%), у чотирьох пацієнток з мутаціями в гені BRCA1 5382 insC, в сімейному анамнезі онкозахворювань відзначено не було (23,1%). Таким чином, можна зробити висновок, що збір анамнезу про випадки онкологічних захворювань в сім'ї не є достатнім і єдиним критерієм відбору при призначенні молекулярно-генетичного тестування мутацій генів BRCA1 / 2.
У проведеному нами дослідженні також була виявлена мутація 300T> G в гені BRCA1 з частотою зустрічальності даного типу мутацій 15,7%. Під час гістологічного дослідження, так само, як і при наявності мутацій 5382insC в гені BRCA1 була відзначена інфільтрірующая протоковая карцинома. Вік пацієнток на момент постановки діагнозу становив 30, 48 і 60 років. Сімейний анамнез також був обтяжений.
При оцінці ролі клінічних складових спадкового РМЗ виявлено, що у 10-ти пацієнток (в 52,6%) з поєднанням двох ознак спадкового РМЗ у всіх випадках були присутні мутації в гені BRCA1. У чотирьох пацієнток з мутацією 5382 insC (21,1%) в гені BRCA1 спостерігалося поєднання трьох клінічних ознак НРМЖ (молодий вік маніфестації захворювання, онкологічно обтяжений анамнез і синхронний або метахронность рак). Одна пацієнтка (5,2%), володарка мутантного аллеля, мала в особистому анамнезі рак яєчників. І чотири пацієнтки (21,05%) мали лише один з перерахованих ознак спадкового раку молочної залози.
Аналіз розподілу мутацій в залежності від віку показав (рис. 2), що найбільш часто мутації в гені BRCA1 маніфестуються у пацієнток у віці від 30-39 років - 57,9%, в групі 40-49 років - 26,3% і в групі старше 50 років в 15,8% випадків, що добре узгоджується з критеріями вікової пенетрантности спадкового РМЗ.
Мал. 2. Зустрічальність мутацій гена BRCA1 у пацієнток з РМЗ в залежності від віку
висновок
Результати проведеного нами аналізу наочно демонструють якісний спектр і частоту зустрічальності мутацій в генах BRCA1 і BRCA2, аналогічну раніше проведеними дослідженнями на території Російської Федерації у пацієнток слов'янської групи [12]. Це дозволяє зробити висновок, що використовувана нами діагностична панель інструментів може бути коректно використана для скринінгу «класичних» спадкових поліморфізмів в генах BRCA1 / 2у пацієнток Півдня Росії, серед яких представники слов'янської групи складають переважну більшість.
бібліографічна посилання
Богомолова О.А., Шатова Ю.С., Верескунова М.І., Чернікова Е.Н., Кучкина Л.П., Луганська Р.Г., Бакуліна С.М., Водолазький Д.І. Гермінальних мутації в генах BRCA1 І BRCA2 У пацієнток ПІВДНЯ РОСІЇ З КЛІНІЧНИМИ ОЗНАКАМИ СПАДКОВОГО раку молочної залози // Сучасні проблеми науки та освіти. - 2017. - № 5 .;
URL: http://www.science-education.ru/ru/article/view?id=26920 (дата звернення: 27.07.2019).
Пропонуємо вашій увазі журнали, що видаються у видавництві «Академія природознавства»
(Високий імпакт-фактор РИНЦ, тематика журналів охоплює всі наукові напрямки)
Ru/ru/article/view?
